梯度洗脫可用于處理不能以等度洗脫分離的樣品，而最常見(jiàn)的使用梯度的因素是多成分保留能力不同，無(wú)法在等度洗脫中全洗脫出來(lái)，或以等度方式無(wú)法達(dá)到滿意的分離效果。總結(jié)下來(lái)，以下幾種情況，可以采用梯度洗脫：

1、多組分樣品的極性范圍大，用等度無(wú)法全部洗脫的樣品；

2、大分子樣品；

3、改善峰峰型；

4、目標(biāo)峰出峰后，短時(shí)間內(nèi)提高有機(jī)相比例，洗脫強(qiáng)保留干擾雜質(zhì)；

5、用等度洗脫無(wú)法達(dá)到分離的情況。

具有不同保留值范圍的多組分，無(wú)法使用同一個(gè)等度wan全洗脫下來(lái)。用同一個(gè)等度，會(huì)出現(xiàn)要么部分成分無(wú)保留沒(méi)法分離，部分強(qiáng)保留無(wú)法洗脫下來(lái)，或一針洗脫時(shí)間過(guò)久的問(wèn)題，這種情況下，選擇梯度洗脫，使流動(dòng)相洗脫能力從弱到強(qiáng)，從而達(dá)到不同保留值范圍的多組分在同一個(gè)條件下實(shí)現(xiàn)分離。

大分子量樣品（肽、蛋白質(zhì)、合成聚合物等）一般采用梯度洗脫分離會(huì)更好，尤其是反相條件。這類(lèi)樣品，往往對(duì)有機(jī)相的量特別敏感，有機(jī)相的微小變化就會(huì)使樣品的保留時(shí)間發(fā)生很大的變化，導(dǎo)致用等度條件檢測(cè)時(shí)，無(wú)法使保留時(shí)間控制在一個(gè)穩(wěn)定合適的范圍內(nèi)。

有些成分，在使用等度洗脫時(shí)，峰型不佳，不能滿足檢測(cè)需求，這種時(shí)候，可以采用梯度洗脫來(lái)改善峰型。因此，哪怕是單一成分的含量測(cè)定，有時(shí)也會(huì)用到梯度洗脫進(jìn)行測(cè)定。

示例：4-哌啶甲酸的檢測(cè)