反相液相色譜柱如何選擇緩沖液PH值

在選擇緩沖液PH值之前，應先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka兩個PH值單位的，有助于獲得好的、尖銳的峰，從HH公式：PH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液 PH值高于或低于Pka兩個單位，化合物中99%以一種形式存在，而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。

 

如果選擇不到合適的，樣品的pKa與流動相的pH非常接近，那么流動相pH微小的變化，都會引起樣品保留時間較大的變動。

 

當化合物只有氨基時，緩沖體系的選擇十分簡單，大多數氨基化合物在PH值小于9時都被質子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應用，你也許會問水的 PH值大約是7，為什么還用緩沖鹽，因為緩沖鹽有助于增加方法的可靠性，以及色譜峰的尖銳性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱，減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用，而使峰更尖銳，任何緩沖液均可應用于氨基化合物的分析，但我們認為PH值等于3的磷酸鉀鹽適合用于氨基化合物的分析。

 

在上面兩個例子中，PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應用，在一般情況下，它是含羧基和氨基化合物分析中的緩沖液，并且我們認為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。