陰離子色譜柱洗脫：

1、洗脫液的選擇：

（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。

（2）要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。

（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

 

2、洗脫方式：離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強度和改變pH值兩種洗脫方式。

（1）改變離子強度的洗脫：在洗脫過程中逐步增大離子強度，從而使與離子交換劑結(jié)合的各個組分被洗脫下來。

（2）改變pH值的洗脫：陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強度進(jìn)行洗脫。

 

3、洗脫速度：洗脫液的流速會影響離子交換分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。一般來說，洗脫速度慢比快的分辨率要好，但過慢會造成分離時間長、樣品擴(kuò)散、譜峰變寬和分辨率降低等。

如果洗脫峰相對集中于某個區(qū)域造成重疊，應(yīng)適當(dāng)縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率。如果分辨率較好，但洗脫峰過寬，可適當(dāng)提高洗脫速度。

 

陰離子色譜柱保留特性的變化規(guī)律及應(yīng)對措施

在離子交換色譜中,存在著3種電離平衡,分別是樣品組分的電離平衡、流動相中緩沖溶液的電離平衡、柱上離子交換基團(tuán)的電離平衡。

陰離子色譜柱保留行為的變化、流動相組成的調(diào)整,會綜合影響到上述的電離平衡,這種影響較為復(fù)雜,并不是一致的。如提高流動相的pH值,會促進(jìn)流動相的電離,增加流動相的洗脫強度,減小樣品組分的保留;pH值的增加同時又會促進(jìn)樣品的電離,增加樣品組分的保留,同時還會抑制陰離子色譜柱上硅烷銨鹽的電離,減小樣品組分的保留。